導(dǎo)讀： 4月23日中央要求各地要結(jié)合疫情防控和檢測(cè)需求，加強(qiáng)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)。三級(jí)綜合醫(yī)院均應(yīng)當(dāng)建立符合生物安全二級(jí)及以上標(biāo)準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，具備獨(dú)立開(kāi)展新型冠病毒檢測(cè)的能力；各級(jí)疾控機(jī)構(gòu)和有條件的?？漆t(yī)院、二級(jí)醫(yī)院、獨(dú)立設(shè)置的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室也應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，提高檢測(cè)能力。對(duì)醫(yī)療資源相對(duì)缺乏、檢測(cè)能力相對(duì)薄弱、疫情防控壓力較大的地區(qū)，特別是陸路邊境口岸，要選擇1家綜合實(shí)力強(qiáng)的縣級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)予以重點(diǎn)支持，實(shí)現(xiàn)縣域內(nèi)醫(yī)療機(jī)構(gòu)具備核酸檢測(cè)能力。
臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱 PCR實(shí)驗(yàn)，是專門(mén)用來(lái)檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測(cè)手段。它可以通過(guò)將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行擴(kuò)增的方法，測(cè)出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測(cè)方法可以測(cè)出普通檢驗(yàn)難以檢測(cè)出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對(duì)樣品要求低等優(yōu)點(diǎn)，因此被臨床醫(yī)生廣為認(rèn)可，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測(cè)部門(mén)的禽疫病診斷。但是，這種實(shí)驗(yàn)需要有能保證絕對(duì)安全、配置合理的實(shí)驗(yàn)室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來(lái)對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)越來(lái)越得到重視，因?yàn)樗鼘?duì)檢測(cè)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。本文主要從臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的平面布局，PCR實(shí)驗(yàn)室基本流程進(jìn)行了介紹。
PCR實(shí)驗(yàn)室布局圖
PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑制備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑制備區(qū)→樣本制備區(qū)→核酸擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗進(jìn)行。
PCR實(shí)驗(yàn)室基本流程
1.試劑制備區(qū)
功能：主要是作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備，試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其它區(qū)域。試劑原材料需貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
超凈工作臺(tái) | 涉及對(duì)細(xì)菌的操作均需在超凈工作臺(tái)下完成 | 蘇州安泰、博科 |
生物安全轉(zhuǎn)運(yùn)箱 | 待檢標(biāo)本的轉(zhuǎn)運(yùn) | 上海颯凌 |
移液器 | 準(zhǔn)確量取特定體積溶液20-100ul | 賽多利斯 |
藥品冷藏箱 | 短期保存 | 海信醫(yī)用HC-5L75F 70L容積不占場(chǎng)地 |
試劑低溫冰箱 | 可選2-8℃、-20℃、-86℃ | 海信醫(yī)用 HC-5L360/HCD-25L210/HD-86L390、HD-86L830BP |
混勻儀 | 移取樣本前需要混勻 | 米歐MIX-30S |
迷你離心機(jī) | 含反應(yīng)混合液的瞬時(shí)離心 | MINI-5k/8k/10k+ |
消毒車 | 空間環(huán)境消毒 | 申興光電 |
滅菌鍋 | 實(shí)驗(yàn)室物品、試劑、培養(yǎng)基消毒滅菌 | SHANAN |
天平（可選配） | 試劑配重 | 奧豪斯 |
2.樣本制備區(qū)
功能：臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)DNA的合成。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
生物安全柜 | 為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴(kuò)散 | 上海力康/蘇州安泰 |
高速離心機(jī) | 濃縮法：高速離心過(guò)柱 | 米歐- MC-15 15000r/min |
高速臺(tái)式冷凍離心機(jī) | 用于收集微生物菌體、細(xì)胞碎片以及其他沉淀物。有些樣品由于在常溫下不太穩(wěn)定，需要低溫環(huán)境。 | Thermo DW17R |
水浴箱 | 樣本56度滅活 | 米歐WT100-2 |
移液器 | 準(zhǔn)確量取特定體積溶液 | 賽多利斯 |
紫外燈/消毒車 | 空間環(huán)境消毒 | 申興光電 |
混勻儀 | 移取樣本前需要混勻 | 米歐- MIX-3000 |
金屬浴 | 用于DNA雜交過(guò)程中控溫 | 米歐DKT200-2 |
八連管離心機(jī) | PCR體系瞬時(shí)離心 | 米歐 mini5k/8k/10k+ |
3.核酸擴(kuò)增區(qū)
功能：主要是DNA擴(kuò)增，已制備的DNA模板和合成的DNA和主反應(yīng)混合液，制備成反應(yīng)混合液等，也可以在本區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。在PCR測(cè)定中，通常在擴(kuò)增后須打開(kāi)反應(yīng)管。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
熒光定量PCR儀 | 核酸定量分析 | 博樂(lè)/羅氏 |
核酸提取儀 | 樣品DNA/RNA提取 | 碩世/天能 |
移液器 | 準(zhǔn)確量取特定體積溶液 | 賽多利斯 |
紫外燈/消毒車 | 空間環(huán)境消毒 | 申興光電 |
4.產(chǎn)物分析區(qū)
功能：主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定，如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè)，此區(qū)域可不設(shè)。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
電泳儀 | 水平電泳用于核酸DNA/RNA檢測(cè)，垂直電泳用于蛋白檢測(cè)，轉(zhuǎn)印電泳用于將蛋白轉(zhuǎn)印到膜上做western檢測(cè) | 伯樂(lè)、勤翔 |
凝膠成像系統(tǒng)/紫外檢測(cè)儀 | 用于核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙酰胺的觀察和拍照；紫外分析儀用于染色后核酸瓊脂電泳膠觀察，不能連接電腦， | 勤翔 |
電爐 | 電泳瓊脂凝膠加熱融化 | 一恒 |
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)備解決方案是上海颯凌科技針對(duì)需要建立PCR實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)院提供的整體解決方案，包括PCR實(shí)驗(yàn)室的搭建、設(shè)備配備及試劑的選擇、檢測(cè)方法的建立等。目前熒光PCR技術(shù)從發(fā)展趨勢(shì)來(lái)看，是各級(jí)醫(yī)院臨床所迫切需求的一項(xiàng)先進(jìn)診斷技術(shù)。開(kāi)展熒光PCR診斷項(xiàng)目將有利于醫(yī)院檢驗(yàn)水平的進(jìn)一步提高，為傳染性疾病的診斷、預(yù)防、控制提供了一項(xiàng)新的有效準(zhǔn)確的檢測(cè)和控制手段。
另一方面，對(duì)于要升級(jí)為三甲的醫(yī)院，衛(wèi)生部有硬性要求，必須具備規(guī)范化的PCR實(shí)驗(yàn)室，從這一方面來(lái)說(shuō)，PCR實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)對(duì)于醫(yī)院的建設(shè)具有重要的意義。
